Autor: MUDr. Vlasta Raušová
Rozvoj mnohočetného myelomu (MM) není podmíněn jedinou kauzální aberací. U asi 45 % pacientů nacházíme translokaci s IGH (gen pro těžký řetězec imunoglobulinu), u dalších cca 50 % jsou přítomné tzv. hyperdiploidie (HRD).
Přítomnost sekundárních aberací naznačuje různý subklonální vývoj onemocnění. Detailní charakterizaci subpopulací umožňuje mj. analýza transkriptomu na úrovni jednotlivých buněk (SCA).
Cílem studie bylo získat detailní informaci o subpopulacích maligních plazmocytů (PC) pomocí přístupu CITE-seq (Cellular Indexing of Transcriptomes and Epitopes by Sequencing), tj. analyzovat genovou expresi jednotlivých buněk MM v kombinaci s identifikací sady 141 povrchových znaků.
Pro CITE-seq byly použity vitálně zamražené mononukleární buňky (MNC) izolované z kostní dřeně pacientů s nově diagnostikovaným MM. Procento PC ve vzorcích MNC bylo v rozmezí 41,4 – 72,6. PC bylo možné tak hodnotit v kontextu dalších buněk kostní dřeně. Testovalo se pět pacientů s různou primární aberací detekovanou pomoci FISH: t(4;14), t(6;14), t(11;14), t(14;16) a HRD. Pro CITE-seq byly MNC inkubovány s TotalSeq™-B Human Universal Cocktail (Biolegend). SCA proběhla na platformě Chromium Controller (10x Genomics).
Výsledky CITE-seq ukázaly překvapivou heterogenitu v expresi genů i povrchových markerů, jak mezi pacienty, tak mezi subpopulacemi nádorových buněk. U jednotlivých pacientů bylo identifikováno 4 až 6 subpopulací PC s rozdílnou expresí jak genů, tak povrchových znaků. Na druhou stranu ve vzorcích s rozdílnou primární aberací byly nalezeny shodné expresní markery definující některé subklony. Jednalo se např. o zvýšenou expresi genů NUSAP1 u subklonů přítomných u pacientů s t(4;14) a t(6;14), nebo GADD45B v subklonech pacientů s t(6;14) a HRD. Vzhledem k heterogenitě mezi subpopulacemi naznačuje exprese stejných genů jejich možnou roli v patogenezi onemocnění.
Přistup CITE-seq ukázal překvapivou intraklonální heterogenitu v nádorových buňkách MM a umožnil podrobnou charakteristiku onemocnění pěti pacientů s rozdílnou primární aberací.
Zdroj: Mayerova J, a kol, Analýza nádorových subpopulací u mnohočetného myelomu pomocí metody CITE-seq, XXXIII. konference dětských hematologů a onkologů České a Slovenské republiky ABSTRAKTA 24.–26. 10. 2024
